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食用油中【胆固醇】的高效液相凝胶渗透色谱法

【胆固醇检测】


目前,有关食品中胆固醇的测定方法主要有气相色谱法,高效液相色谱法,比色法。这些方法都可以完成胆固醇的检测,但样品基质复杂,目标物含量低导致分析结果不理想,而采用凝胶渗透色谱法(GPC)对样品进行前处理,可以有效解决上述问题

凝胶渗透色谱法采用惰性多孔材料为固定相,利用空间排阻效应将分子大小不同的物质分离,达到制备纯化的目的。本文采用全自动凝胶净化系统,提取目标物胆固醇,用高效液相色谱仪进行测定,从而建立一个简单,快捷,准确的食用油中胆固醇的测定方法。


【试剂】


1.胆固醇标品(99%)

2.甲醇(HPLC)

3.乙酸乙酯(分析纯)

4.环己烷(分析纯)

5.石油醚(分析纯)

6.水(超纯水)


【仪器设备】


1。SGPCS-凝胶净化系统

2.凝胶渗透色谱柱

3。LC10高效液相色谱仪(等度)

4.旋转蒸发仪


【含量测定】


标准溶液制备

准确称取胆固醇标准品0.05g,用无水乙醇溶解并定容至 50ml作为标准储备液放置0~4℃冰箱中备用。

胆固醇标准溶液:分别吸取标准储备液(1.0mg/ml)25ul、50ul、100ul、500ul、2000ul,用无水乙醇定容至10ml,现配现用。


试样的制备

分别称取0。5g植物油和0。5g鲜奶,用等体积混合的环己烷和乙酸乙酯混合溶剂定容至5ml,供后续分离净化使用。抽取试样注入凝胶净化系统,流动相:等体积混合的环己烷和乙酸乙酯溶液,流速:5ml/min,收集7。5-16。5min馏分于试剂瓶中,然后移至旋转蒸发仪中蒸发至干,加入5ml乙醇溶解,供HPLC检测用。


【色谱条件】


色谱柱:C18  250mm*4。6mm  粒度5um

流动相:乙醇

流速:1.0ml/min

紫外检测器波长:208nm


【谱图】


图片111.png


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